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比濁法又稱濁度測定法。濁度法系利用檢測鱟試劑與內(nèi)毒素反應(yīng)過程中的濁度變化而測定內(nèi)毒素含量的方法。
Teller等首先報導(dǎo)將鱟試劑與內(nèi)毒素作用后,可產(chǎn)生凝膠從而使液體呈混濁,其濁度與內(nèi)毒素在一定條件下(內(nèi)毒素濃度20~100pg/ ml)呈線性關(guān)系。此法有如下優(yōu)點(diǎn)①減少了鱟試劑的用量,②快速,③操作簡便,④半自動化。
本試驗(yàn)的方法是:將已適當(dāng)稀釋后的鱟試劑與處理后的被檢標(biāo)本各0.1ml加入微孔中,振顫器振動60秒鐘,使兩者充分混勻。放置37℃60分鐘,然后取出在分光光度計360~380nm處讀取光密度值(OD)。另以系列稀釋的標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)毒素作陽性對照,并將其OD值與內(nèi)毒素量間的關(guān)系描成標(biāo)準(zhǔn)曲線。比較試驗(yàn)管與對照管的OD值,即可知道標(biāo)本中內(nèi)毒素的含量。
在操作中,孵育的時間是至關(guān)重要的,因?yàn)殡S著時間的延長,濁度亦將增加,一般孵育1小時即可終止其反應(yīng)。即使在室溫中,如時間過長濁度亦會增加,因此孵育后應(yīng)立即讀取OD值。讀取OD值時,應(yīng)每隔1分鐘進(jìn)行一次,共四次,取其平均值,變異系數(shù)應(yīng)不超過1%。
另外,某些注射藥品及放射性藥物本身帶有顏色或濁度時,必須減去標(biāo)本本身的OD值。